Obsah
Elektroforéza na agarózovom géli je vedecký postup používaný vo výskume a diagnostických projektoch zahŕňajúcich štúdium nukleových kyselín. Umožňuje vedcovi alebo technikovi oddeliť nabité molekuly nukleovej kyseliny, ako je DNA, podľa ich veľkosti, a použije sa na analýzu produktov vytvorených experimentom, ako je napríklad polymerázová reťazová reakcia. Rutinne sa používa, pretože je nenákladný, rýchly proces a umožňuje regeneráciu analyzovanej nukleovej kyseliny.
Výroba gélu
Zozbierajte všetky potrebné predmety a vyčistite ich 70% etanolom. Položky zahŕňajú gélovú liatu, lepiacu pásku, laboratórnu agarózu, banky alebo valce, 10x koncentráciu (Tris-boritan-EDTA, TBE), tlmivý roztok, etídiumbromid, farbivo a analyzovanú vzorku. Tiež sa uistite, že máte zásobník gélovej elektroforézy a zdroj energie. Agaróza sa pripraví odvážením príslušného množstva DNA pásky, ktorá sa má analyzovať, zmiešaním s TBE pufrom a roztavením v mikrovlnnej rúre. Všeobecne je 1% až 2% roztok dostatočný na pokrytie mnohých reťazcov DNA študovaných v dennej molekulárnej biológii. Malé DNA vyžadujú koncentrovanejšie gély, zatiaľ čo väčšie vyžadujú viac zriedených gélov. Roztok agarózy sa zmieša s etídiumbromidom, ktorý sa počas postupu elektroforézy viaže na nukleovú kyselinu. Tento roztok sa naleje do taveniny taveniny gélu, rovnako ako sa vloží tvarovací hrebeň a zmes sa nechá stuhnúť.
Vložte a aktivujte gél
Gél sa vyberie z misky a ponorí sa do zásobníka gélovej elektroforézy obsahujúceho tlmivý roztok. Vzorky, ktoré sa majú analyzovať, sa zmiešajú s farbivami a umiestnia sa do jamiek v géli vytvorenom hrebeňom. Zahrnutý je aj marker alebo meradlo, aby výskumník mohol vidieť priebeh elektroforézy a určiť veľkosť vytvorených fragmentov. Potom sa na gél aplikuje elektrický prúd, ktorý núti vzorku migrovať z jedného konca gélu na druhý. Počas tohto procesu sa nukleové kyseliny vo vzorke separujú na fragmenty rôznych veľkostí, pričom väčšie molekuly sa približujú k jamke a menšie molekuly sa pohybujú na druhý koniec gélu.
Gél sa analyzuje
Po ukončení postupu elektroforézy sa gél vyberie zo zásobníka a umiestni do UV transiluminátora, ktorý osvetľuje fragmenty nukleovej kyseliny, ktoré sa viažu na fluorescenčný etídiumbromid. Urobí sa takáto fotografia a pruhy nukleových kyselín sa môžu merať podľa vzdialenosti, ktorá sa migrovala gélom. Stupnica ich rozdelí do pásiem známych veľkostí a môže byť použitá na vedenie výskumníka počas analýzy.