Obsah
Tuberkulóza je infekčné ochorenie spôsobené baktériou Mycobacterium tuberculosis a je to ochorenie dýchacích ciest charakterizované tvorbou hľuzy, nekrózou, abscesmi, fibrózou a kalcifikáciou v pľúcach. Môže tiež infikovať obličky, lymfatické uzliny, kosti, kĺby a pokožku.
Primárna laboratórna diagnóza tohto bacila spočíva v jeho zafarbení s cieľom vizualizácie baktérií pod mikroskopom. Vzorkou podľa výberu je spút alebo bronchoalveolárna laváž na identifikáciu respiračnej infekcie alebo vzorka skutočného tkaniva.
Fyziológia
Mycobacterium tuberculosis je organizmus v tvare tyčinky (bacily), nepohyblivý, nepovinný spór. Táto baktéria meria 0,4 x 3 mikrometre na dĺžku a každých 15 až 24 hodín podstupuje binárne štiepenie (delenie reprodukčnej bunky), čo sa v porovnaní s inými baktériami považuje za pomalé. Z tohto dôvodu sa môže prítomnosť mykobaktérií v kultivačnom médiu prejaviť až deväť týždňov.
Tento organizmus je citlivý na UV svetlo a teplo (napríklad pasterizáciu), odoláva však chemickým dezinfekčným prostriedkom.
Gramova škvrna
Mycobacterium tuberculosis nemožno skutočne klasifikovať ako grampozitívne alebo gramnegatívne. Táto klasifikácia sa robí na základe množstva peptidoglykánu v bunkovej stene baktérie. Grampozitívne druhy majú silnú vrstvu tejto molekuly (asi 90%), zatiaľ čo gramnegatívne druhy majú tenkú vrstvu (od 5% do 20%). Gramove škvrny prenikajú do bunkovej steny a viažu sa na chemické zložky v nej. Pod mikroskopom zafarbia zafarbené baktérie fialové alebo ružové.
Pri mycobacterium tuberculosis je bunková stena zložená z peptidoglykánu, ale aj komplexných lipidov, ktoré bránia prieniku gramu farbiva. Bunková stena tiež odoláva zafarbeniu kyselinou alebo alkoholom, preto sa mykobaktérium nazýva „odolné voči kyselinám“. Lipidy bunkovej steny sú kyselina mykolová, strunový faktor a D-vosk. Ak by sa baktérie mali zafarbiť, bunky by vyzerali grampozitívne alebo slabo bledé s veľmi malou farbou.
Aby ste videli baktérie, musíte použiť špeciálne škvrny, ako je napríklad škvrna Aumarine alebo Zhiel-Neelson.
Aumarín-rodamínové farbivo
Proces využívajúci auramín-rodamín používa žlté fluorescenčné farbivo na vizualizáciu mycobacterium tuberculosis pod fluorescenčným mikroskopom. Ako kontrastné farbivo sa môže použiť manganistan draselný alebo akridínová oranžová. Pod šošovkou budú bakteriálne bunky zelené.
Auramín-rodamínové farbivo je citlivejšie ako Zhiel-Neelson a je ekonomicky životaschopnejšie.
Ziehl-Neelsonovo sfarbenie
Farbenie Ziehl-Neelson vytvorili vedci Franz Ziehl a Friedrich Neelsen a používa zahriaty karbol-fuchsín, vysokú koncentráciu kyslého alkoholu a kontrastné farbivo, ako je zelený malachit alebo metylénová modrá. Pod fluorescenčným mikroskopom budú bakteriálne bunky pôsobiť žiarivo ružovo.
Farbivo Ziehl-Neelson je štandardom excelentnosti pre predbežnú identifikáciu mycobacterium tuberculosis a mycobacterium leprae.
Agar
Sekundárne po identifikácii mikroskopie sa musí mycobacterium tuberculosis pestovať na špeciálnej agarovej kultúre. Lowenstein-Jensen želatína obsahuje zložité organické látky (ako sú vajcia a zemiaky), soli, glycerol a malachitová zeleň (ktorá inhibuje iné baktérie). Na ďalšiu inhibíciu kontaminujúcich mikroorganizmov je možné pridať antibiotiká. Vzorka sa umiestni na tento agar a baktérie rastú za tri až deväť týždňov.
Na podporu rastu aj najmenšieho množstva cieľových baktérií je možné použiť roztok živnej kultúry, ako je albumín a biotín. Toto je známe ako Middlebrook 7H9 (alebo 7H12).
V obidvoch médiách sa kolónie budú javiť ako malé, vyleštené, svetlohnedé kolónie.
Vďaka pokročilej technológii je dnes možné pestovať mycobacterium tuberculosis pomocou automatickej čítačky. Kvapalný roztok média Middlebrook 7H9 a fluorescenčná indikátorová zlúčenina sa používajú na sledovanie rastu a hlásenie pozitívnej alebo negatívnej infekcie.